#+title: Immuno-analyse #+filetags: :biochimie: * Anticorps Structure en Y avec les extrémités des branches = chaînes lourdes, le reste = chaîne légère | _Classe | G | A | M | E | D | |--------------+-------------------+------------------+----------------+----------------+---------------| | Localisation | Sang | Sécrétion | Lymphocytes B | Basophiles | Lymphocytes B | | | | muqueurs | | Mastocytes | | |--------------+-------------------+------------------+----------------+----------------+---------------| | Rôle | Neutralise | Agglutination | Agglu | Allergie | Active LB | | | Bactéries , virus | Neutralisation | Voie classique | Neutralisation | | | | toxine | Bactiries, virus | complément | parasite | | IgG= 75% serum, IgA=15%, IgM = 10% Zone vavariation: Isotopie (domaine constant), allotypie (jonction), idiotopie (domaines variables) Ag-AC liason faible. La partie Ag est l'épitope, la partie Ac le paratope ** Ac monoclonaux Ag humonai dans souris puis prélèvement lymphocytes B activés Création de cellules hybrides (cellules myélome + lymphocytes) mises en culture ** Type utilisé dans dosage Ac monoclonale = 3-6mois de synthèse, cher, spécifique, forte affinite, pas de réaction croisée Ac polyclonale : 1-2mois production, peu spécfiqiue, affinité variable, réaction croissées * Méthodes - Direct = "sandwitch": Ag est "coincé" entre un Ac et un autre Ac avec un marqueur -> le signal est proportionnel - Indirecte : mélange d'Ag à doser et d'Ag marqués - peu d'Ag à doser, les Ag marqués vont se fixer : signal important - sinon, ils vont "prendre la place" sur les Ac -> signal faible Phases: homogone (liquide) , hétérogène (complexe fixé sur support solide) Luminescence >> autre marquage * Interférence - Effet crochet: forte quantité d'Ag à doser mais le signal va diminuer (paradoxal !) - Effet matrice : impact pH, température, concentration Ag ... sur la liason Ag-Ac NB: stéroïdes = sensibles ! - Ac hétérophiles: contact fréquent avec animaux, maladies auto-immunes, immunothérapies/scintigarphies - Auto-Ac : réagissent au lieu de l'anticorps réactionnel - [[id:38c45f8a-6855-4984-9b84-5e67165d4b5c][Facteur rhumatoïde]] - [[id:f1bbc829-f5dc-49f8-97b5-0d6ce1d9ef59][Cryoglobuline]] - réaction croisée avec un autre antigène (ex: cortisone) - [[id:03d7f0cf-4383-49df-ae84-5526ce8c304a][Biotine]] - Hétérogénéité moléculaire = mauvaise reconnaissanec Ag- par Ac du fait de la variabilité inter ou intra-individuelles * Détection interférences - dilution: effet crochet/matrice - surchage : autoAC et dosaeg sans étalon - cryoglobuilne : 7 jours à 4`` * Principe éléctrochimiluminescence Ag à doser = en sandwitch entre 1 Ac marqué biotine et un détection marqué ruthénium Ces complexes sont captusé sur des microparticules magnétiques (streptavidine) puis plaquées contre la paroi Enfin un courant électrique eexcite de ruthénium qui émet des photons proportionnellement quantié Ag à doser * Exemples - [[id:b13e043b-bf21-422a-98e7-efb3c5efd5a5][β2-microglobuline]] - [[id:7bb9024e-649c-4382-abf6-9db0be217d4d][CA 15-3]] - [[id:d83dec28-0537-46a0-beb0-8f6e09c78f1e][CA 19-9]] - [[id:d59e007e-2d26-42ef-b349-cade464c37f9][CA 125]] - [[id:44fc26b7-6245-4e58-8d1e-6cb376fecd3a][estradiol]] - [[id:e93a2599-8f0f-42aa-81f4-e276917dd322][FSH]] - [[id:1dff1823-fb97-4ba5-90fc-c982f20fb47b][LH]] - troponine : IDM - NT-proPNB insuffisance cardiaque - cortisol - progestérone - PTH - Folates (synthèse ADN) - B12 (synthèse ADN) - [[id:763dc0db-c8f4-4b29-a9a4-ec096c8e9d81][AFP]]