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:ID: 29e12e8e-5d9f-4e2f-b8cb-97b38dc19bbd
:END:
#+title: Immuno-analyse
#+filetags: biochimie
* Anticorps
Structure en Y avec les extrémités des branches = chaînes lourdes, le reste = chaîne légère
| _Classe | G | A | M | E | D |
|--------------+-------------------+------------------+----------------+----------------+---------------|
| Localisation | Sang | Sécrétion | Lymphocytes B | Basophiles | Lymphocytes B |
| | | muqueurs | | Mastocytes | |
|--------------+-------------------+------------------+----------------+----------------+---------------|
| Rôle | Neutralise | Agglutination | Agglu | Allergie | Active LB |
| | Bactéries , virus | Neutralisation | Voie classique | Neutralisation | |
| | toxine | Bactiries, virus | complément | parasite | |
IgG= 75% serum, IgA=15%, IgM = 10%
Zone vavariation: Isotopie (domaine constant), allotypie (jonction), idiotopie (domaines variables)
Ag-AC liason faible. La partie Ag est l'épitope, la partie Ac le paratope
** Ac monoclonaux
Ag humonai dans souris puis prélèvement lymphocytes B activés
Création de cellules hybrides (cellules myélome + lymphocytes) mises en culture
** Type utilisé dans dosage
Ac monoclonale = 3-6mois de synthèse, cher, spécifique, forte affinite, pas de réaction croisée
Ac polyclonale : 1-2mois production, peu spécfiqiue, affinité variable, réaction croissées
* Méthodes
- Direct = "sandwitch": Ag est "coincé" entre un Ac et un autre Ac avec un marqueur -> le signal est proportionnel
- Indirecte : mélange d'Ag à doser et d'Ag marqués
- peu d'Ag à doser, les Ag marqués vont se fixer : signal important
- sinon, ils vont "prendre la place" sur les Ac -> signal faible
Phases: homogone (liquide) , hétérogène (complexe fixé sur support solide)
Luminescence >> autre marquage
* Interférence
- Effet crochet: forte quantité d'Ag à doser mais le signal va diminuer (paradoxal !)
- Effet matrice : impact pH, température, concentration Ag ... sur la liason Ag-Ac
NB: stéroïdes = sensibles !
- Ac hétérophiles: contact fréquent avec animaux, maladies auto-immunes, immunothérapies/scintigarphies
- Auto-Ac : réagissent au lieu de l'anticorps réactionnel
- [[id:38c45f8a-6855-4984-9b84-5e67165d4b5c][Facteur rhumatoïde]]
- [[id:f1bbc829-f5dc-49f8-97b5-0d6ce1d9ef59][Cryoglobuline]]
- réaction croisée avec un autre antigène (ex: cortisone)
- [[id:03d7f0cf-4383-49df-ae84-5526ce8c304a][Biotine]]
- Hétérogénéité moléculaire = mauvaise reconnaissanec Ag- par Ac du fait de la variabilité inter ou intra-individuelles
* Détection interférences
- dilution: effet crochet/matrice
- surchage : autoAC et dosaeg sans étalon
- cryoglobuilne : 7 jours à 4``
* Principe éléctrochimiluminescence
Ag à doser = en sandwitch entre 1 Ac marqué biotine et un détection marqué ruthénium
Ces complexes sont captusé sur des microparticules magnétiques (streptavidine) puis plaquées contre la paroi
Enfin un courant électrique eexcite de ruthénium qui émet des photons proportionnellement quantié Ag à doser
* Exemples
- [[id:b13e043b-bf21-422a-98e7-efb3c5efd5a5][β2-microglobuline]]
- [[id:7bb9024e-649c-4382-abf6-9db0be217d4d][CA 15-3]]
- [[id:d83dec28-0537-46a0-beb0-8f6e09c78f1e][CA 19-9]]
- [[id:d59e007e-2d26-42ef-b349-cade464c37f9][CA 125]]
- [[id:44fc26b7-6245-4e58-8d1e-6cb376fecd3a][estradiol]]
- [[id:e93a2599-8f0f-42aa-81f4-e276917dd322][FSH]]
- [[id:1dff1823-fb97-4ba5-90fc-c982f20fb47b][LH]]
- troponine : IDM
- NT-proPNB insuffisance cardiaque
- cortisol
- progestérone
- PTH
- Folates (synthèse ADN)
- B12 (synthèse ADN)
- [[id:763dc0db-c8f4-4b29-a9a4-ec096c8e9d81][AFP]]
:PROPERTIES:
:ID: 575c426e-5d2a-4114-9a2e-b0d4af95c53b
:END:
#+title: Spectrophotométrie
#+filetags: biochimie
Longueur d'onde visible (100-800nm)
Loi de Beer-Lambert : relation entre l'absorbance (densité optique) et rapporté d'intensité luminieuses (incident et transmise)
* Méthodes
- consommation du substrat (acide urique)
- augmentation du produit (coenzyme A)
Pour limiter les interférences
- lecture à 2 longeures d'ondes différentes
- variantion de l'absorbance dans le temps
- soustraction du blanc (absorbance non spécifique)
* Interférence
Surestimé si hémoglobilen, ictère ou lactescence
- Ictère 480-505nm
- Hémolyse : 570-600nm
- Lactescence : 660-700nm
Vérifié si l'automate rende un valeur = intensité d'interférence
- [[id:6a36feab-5f08-4d1d-9e3c-ae09d589daf2][Albumine]]
- [[id:02953d37-3891-43b1-9e07-cb4681e5e44c][bilirubine]]
- [[id:e618c88d-3a3a-483a-bb75-30dde2738c01][Calcium]]
- [[id:97cfbabe-78e8-49e8-8b00-01e47a6f2da9][Créatinine]]
- [[id:1aa04c29-ad9a-48e0-9392-73a8a5deee65][Fer]]
- [[id:bec091db-6da1-46ad-8c31-c55e551fbc36][Magnésium]]
- [[id:bab652dd-fa28-4dba-941d-7e4b32902525][Phosphore inorganique]]
- [[id:5ca3120e-340e-4228-9d79-8111105208f7][Protéines sériques totales]]
- [[id:6b2862c8-b11d-44d7-b5a4-abd1272b6e86][Protéines urinaires/LCR]]
* Dosage enzymatique en cinétique
** Absorbance propre
- [[id:0cd6155a-54ba-4718-a639-67944c6b1c47][Acide urique]]
** Clivé par l'enzyme à doser libérant un colorant
- [[id:257d79ff-411a-4ba7-83ed-459856b5d7fa][Phosphatase alcalines]]
- [[id:08f57dfb-caed-4cba-ac90-f0bcffcdb7b4][γGT (gammaglutamyl-transférase)]]
- [[id:c691319f-47cc-4586-86c6-121dae677abf][Lipase]]
- [[id:d70072d4-776f-4b80-8df7-0d2526ca269d][α-Amylase]]
** Substrat réagissant avec une enzyme utilisant le cofacteur NADH
Mesure 340nm
- [[id:5e7c2de5-958a-4d37-8796-4f18d45df53b][Urée]]
- [[id:977fa2d7-2989-4f7a-afa4-6be072722c41][Ammoniac]]
- [[id:90cbcd7e-9606-47b8-ad0b-2c4d38996b1b][Transaminases (ASAT, ALAT)]]
- [[id:0286b98f-eb1f-41f0-80c5-ecfe06e243da][Créatine kinase]]
- [[id:d3c7d1e8-2219-4be5-86e1-34c6dbc77a70][LDH]]
- [[id:48f25a79-0610-4804-b404-8d3aefdb918e][Glucose]]
- [[id:714ee729-bccd-4465-88df-04b8824f5098][Acide lactique]]
- [[id:b29858f9-80d4-409e-b006-ca8c80c3e849][Bicarbonates]]
- [[id:4e543bc3-7e7e-4f29-a0f2-898f4539b8e5][Éthanol]]
- [[id:b86a1b39-27b0-43e3-8630-7840234e9c71][Acides biliaires]]
** Réaction de Trinder
Réaction aboutissant à formation H2O2 qui va catalyse la synthèse d'un olorant
Interférence: ce qui dégrade le H2O2 (acide ascorbique (vitamine C), dopamine
- [[id:e5519b58-b8fd-4ae1-9585-aa5223d72431][Cholestérol HDL]]
- [[id:b2e9a998-da30-4b85-8f7d-6af80ce3c059][Cholestérol total]]
- [[id:3093198d-a9d2-4464-a453-9b6bffb03841][Cholestérole LDL]]
- [[id:f7fa1113-bc2f-4ca2-b99f-eb4a7f4ed346][Triglycérides]]
* Dosage colorimétrique en point final
:PROPERTIES:
:ID: 6de5833a-cec5-4560-8e3d-36fde81cb1a7
:END:
#+title: Méthodes de dosage
#+filetags: biochimie
[[id:be1c72fe-025f-4e5e-8118-e401f2df39f4][Spectrométrie de masse : principes]]
[[id:ae6c4672-b071-491d-bfbc-ef1a4ea96e47][Potentiométrie]]
[[id:575c426e-5d2a-4114-9a2e-b0d4af95c53b][Spectrophotométrie]]
[[id:29e12e8e-5d9f-4e2f-b8cb-97b38dc19bbd][Immuno-analyse]]
:PROPERTIES:
:ID: 291d08be-d64c-49b2-b61a-1edd34b3d7ab
:END:
#+title: Préalbumine (transthyrétine)
#+filetags: biochimie néphélémétrie
Synthésée par le foie
Bon marqueur des capacités de synthèse hépatique
Marqueur de nutrition parentérale (demi-vie 2 jours) -> calcul du score PINI (Pronostic Inflammatory and Nutritional Index)
- majeur si 21-30
- décès si >30
- oro x CRP / (alb x préalb)
Transporte thyroxine et rétinol
Diminué : malnutrition
:PROPERTIES:
:ID: ae6c4672-b071-491d-bfbc-ef1a4ea96e47
:END:
#+title: Potentiométrie
* Principe
Mesure d''une différence de potentiel entre 2 électrodes plongée dans une solution.
Une électrode esrt de référence.
La concentration impose la différence de potentiel
Une jonction inoique entre les électrodes laisse passer les ions sans fuite de la solution
* Électrode à membrane
la membrane permet le passage des ions (entre les H+ de la solution et N+ du verre)
Elle est au fond de l'électrode, entre la solution et l'électrode
La surface est ionisable -> charge de surface
On calcule la différence de potentiel entre l'intérieur et l'extérieur de la membrane
(qui sera comparée à celle de l'électrode de référence)
* Automatisation
Module ISE (Ion Selective Electrode)
En «limite de phase" (= au contact de la membrane)
La membrane est équilibrée avec les ions de la solution de référence (Na+, K+ et Cl-)
La différence de potentiel est proportionnelle à la concentration en Na+, K+ et Cl- (équation de Nernst)
** Types
- direct = dosage et résultat rendu par litre d'eau
- *indirect* = dosage sur une dilutaion par litre de plasma mais rendu par litre d'eau
*Risque de pseudohyponatrémie* si l'eau plasmatique est remplacée par protéine/lipides
En effet,
on rend Na+/eau plasmatique en l'approchant par Na+/volume plasmatique.
En temps normal, eau plasmatique = 93% du volume plasmatique -> erreur 7%
Si l'eau plasmatique est diminuée, on n'en tient pas compte donc la concnentration sera sous-estimée
*regarder les proétine* : annulé si prot > 120G/L, commentaire si 100-120
Si Na+ < 132 et prot > 90 : à contrôler, risque pseudohyponatrémie
* Indication clinique
- Sodium : hydratation intracellulaire (136-145)
- Potassium : fonction cardiaque (3.5-5.1)
- hlore : insuf rénale, acidose métabolique (98-109)
* Facteurs de risque
- âge
- risque vasculaire
- ATCD thrombotiques
- leucocytosnf thrombocytose
- JAK2 V617N, CALR
- aspirine
- cytoréduction
* Traitement
Cytoréducteur: hydroxycarbamide, anagrelide, interferon
- allergies, médicaments
- [[denote:20240728T135539][Transthyrétine (pré-albumine)]]
* Persistante
1. Frotti sanguin
1. dysplase : SF3B1 -> BOM: anémie sidéroblastique, SMD
2. sinon BCR-ABL
1. oui : [[denote:20240815T224958][Leucémie myéloïde chronique]]
2. sinon : JAK2, CALR, MPL -> [[denote:20240815T210446][Thrombocytémie essentielle]] [[denote:20240722T222950][Polyglobuline de Vaquez]],[[denote:20240815T210617][Myélofibrose primitive]]
#+title: Immuno-analyse
#+filetags: :biochimie:
* Anticorps
Structure en Y avec les extrémités des branches = chaînes lourdes, le reste = chaîne légère
| _Classe | G | A | M | E | D |
|--------------+-------------------+------------------+----------------+----------------+---------------|
| Localisation | Sang | Sécrétion | Lymphocytes B | Basophiles | Lymphocytes B |
| | | muqueurs | | Mastocytes | |
|--------------+-------------------+------------------+----------------+----------------+---------------|
| Rôle | Neutralise | Agglutination | Agglu | Allergie | Active LB |
| | Bactéries , virus | Neutralisation | Voie classique | Neutralisation | |
| | toxine | Bactiries, virus | complément | parasite | |
IgG= 75% serum, IgA=15%, IgM = 10%
Zone vavariation: Isotopie (domaine constant), allotypie (jonction), idiotopie (domaines variables)
Ag-AC liason faible. La partie Ag est l'épitope, la partie Ac le paratope
** Ac monoclonaux
Ag humonai dans souris puis prélèvement lymphocytes B activés
Création de cellules hybrides (cellules myélome + lymphocytes) mises en culture
** Type utilisé dans dosage
Ac monoclonale = 3-6mois de synthèse, cher, spécifique, forte affinite, pas de réaction croisée
Ac polyclonale : 1-2mois production, peu spécfiqiue, affinité variable, réaction croissées
* Méthodes
- Direct = "sandwitch": Ag est "coincé" entre un Ac et un autre Ac avec un marqueur -> le signal est proportionnel
- Indirecte : mélange d'Ag à doser et d'Ag marqués
- peu d'Ag à doser, les Ag marqués vont se fixer : signal important
- sinon, ils vont "prendre la place" sur les Ac -> signal faible
Phases: homogone (liquide) , hétérogène (complexe fixé sur support solide)
Luminescence >> autre marquage
* Interférence
- Effet crochet: forte quantité d'Ag à doser mais le signal va diminuer (paradoxal !)
- Effet matrice : impact pH, température, concentration Ag ... sur la liason Ag-Ac
NB: stéroïdes = sensibles !
- Ac hétérophiles: contact fréquent avec animaux, maladies auto-immunes, immunothérapies/scintigarphies
- Auto-Ac : réagissent au lieu de l'anticorps réactionnel
- [[id:38c45f8a-6855-4984-9b84-5e67165d4b5c][Facteur rhumatoïde]]
- [[id:f1bbc829-f5dc-49f8-97b5-0d6ce1d9ef59][Cryoglobuline]]
- réaction croisée avec un autre antigène (ex: cortisone)
- [[id:03d7f0cf-4383-49df-ae84-5526ce8c304a][Biotine]]
- Hétérogénéité moléculaire = mauvaise reconnaissanec Ag- par Ac du fait de la variabilité inter ou intra-individuelles
* Détection interférences
- dilution: effet crochet/matrice
- surchage : autoAC et dosaeg sans étalon
- cryoglobuilne : 7 jours à 4``
* Principe éléctrochimiluminescence
Ag à doser = en sandwitch entre 1 Ac marqué biotine et un détection marqué ruthénium
Ces complexes sont captusé sur des microparticules magnétiques (streptavidine) puis plaquées contre la paroi
Enfin un courant électrique eexcite de ruthénium qui émet des photons proportionnellement quantié Ag à doser
* Exemples
- [[id:b13e043b-bf21-422a-98e7-efb3c5efd5a5][β2-microglobuline]]
- [[id:7bb9024e-649c-4382-abf6-9db0be217d4d][CA 15-3]]
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- [[id:1dff1823-fb97-4ba5-90fc-c982f20fb47b][LH]]
- troponine : IDM
- NT-proPNB insuffisance cardiaque
- cortisol
- progestérone
- PTH
- Folates (synthèse ADN)
- B12 (synthèse ADN)
- [[id:763dc0db-c8f4-4b29-a9a4-ec096c8e9d81][AFP]]
#+title: Spectrophotométrie
#+filetags: :biochimie:
Longueur d'onde visible (100-800nm)
Loi de Beer-Lambert : relation entre l'absorbance (densité optique) et rapporté d'intensité luminieuses (incident et transmise)
* Méthodes
- consommation du substrat (acide urique)
- augmentation du produit (coenzyme A)
Pour limiter les interférences
- lecture à 2 longeures d'ondes différentes
- variantion de l'absorbance dans le temps
- soustraction du blanc (absorbance non spécifique)
* Interférence
Surestimé si hémoglobilen, ictère ou lactescence
- Ictère 480-505nm
- Hémolyse : 570-600nm
- Lactescence : 660-700nm
Vérifié si l'automate rende un valeur = intensité d'interférence
* Dosage colorimétrique en point final
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- [[id:5ca3120e-340e-4228-9d79-8111105208f7][Protéines sériques totales]]
- [[id:6b2862c8-b11d-44d7-b5a4-abd1272b6e86][Protéines urinaires/LCR]]
* Dosage enzymatique en cinétique
** Absorbance propre
- [[id:0cd6155a-54ba-4718-a639-67944c6b1c47][Acide urique]]
** Clivé par l'enzyme à doser libérant un colorant
- [[id:257d79ff-411a-4ba7-83ed-459856b5d7fa][Phosphatase alcalines]]
- [[id:08f57dfb-caed-4cba-ac90-f0bcffcdb7b4][γGT (gammaglutamyl-transférase)]]
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- [[id:d70072d4-776f-4b80-8df7-0d2526ca269d][α-Amylase]]
** Substrat réagissant avec une enzyme utilisant le cofacteur NADH
Mesure 340nm
- [[id:5e7c2de5-958a-4d37-8796-4f18d45df53b][Urée]]
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- [[id:b86a1b39-27b0-43e3-8630-7840234e9c71][Acides biliaires]]
** Réaction de Trinder
Réaction aboutissant à formation H2O2 qui va catalyse la synthèse d'un olorant
Interférence: ce qui dégrade le H2O2 (acide ascorbique (vitamine C), dopamine
- [[id:e5519b58-b8fd-4ae1-9585-aa5223d72431][Cholestérol HDL]]
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#+title: Méthodes de dosage
#+filetags: biochimie
- [[denote:20240724T230401][Spectrométrie de masse]]
- [[denote:20240630T182055][Potentiométrie]]
- [[denote:20240630T235344][Spectrophotométrie]]
- [[denote:20240703T225225][Immuno-analyse]]
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#+title: Préalbumine (transthyrétine)
#+filetags: biochimie néphélémétrie
Synthésée par le foie
Bon marqueur des capacités de synthèse hépatique
Marqueur de nutrition parentérale (demi-vie 2 jours) -> calcul du score PINI (Pronostic Inflammatory and Nutritional Index)
- majeur si 21-30
- décès si >30
- oro x CRP / (alb x préalb)
Transporte thyroxine et rétinol
Diminué : malnutrition
#+title: Potentiométrie
* Principe
Mesure d''une différence de potentiel entre 2 électrodes plongée dans une solution.
Une électrode esrt de référence.
La concentration impose la différence de potentiel
Une jonction inoique entre les électrodes laisse passer les ions sans fuite de la solution
* Électrode à membrane
la membrane permet le passage des ions (entre les H+ de la solution et N+ du verre)
Elle est au fond de l'électrode, entre la solution et l'électrode
La surface est ionisable -> charge de surface
On calcule la différence de potentiel entre l'intérieur et l'extérieur de la membrane
(qui sera comparée à celle de l'électrode de référence)
* Automatisation
Module ISE (Ion Selective Electrode)
En «limite de phase" (= au contact de la membrane)
La membrane est équilibrée avec les ions de la solution de référence (Na+, K+ et Cl-)
La différence de potentiel est proportionnelle à la concentration en Na+, K+ et Cl- (équation de Nernst)
** Types
- direct = dosage et résultat rendu par litre d'eau
- *indirect* = dosage sur une dilutaion par litre de plasma mais rendu par litre d'eau
*Risque de pseudohyponatrémie* si l'eau plasmatique est remplacée par protéine/lipides
En effet,
on rend Na+/eau plasmatique en l'approchant par Na+/volume plasmatique.
En temps normal, eau plasmatique = 93% du volume plasmatique -> erreur 7%
Si l'eau plasmatique est diminuée, on n'en tient pas compte donc la concnentration sera sous-estimée
*regarder les proétine* : annulé si prot > 120G/L, commentaire si 100-120
Si Na+ < 132 et prot > 90 : à contrôler, risque pseudohyponatrémie
* Indication clinique
- Sodium : hydratation intracellulaire (136-145)
- Potassium : fonction cardiaque (3.5-5.1)
- hlore : insuf rénale, acidose métabolique (98-109)
:PROPERTIES:
:ID: ae6c4672-b071-491d-bfbc-ef1a4ea96e47
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#+title: Potentiométrie
* Principe
Mesure d''une différence de potentiel entre 2 électrodes plongée dans une solution.
Une électrode esrt de référence.
La concentration impose la différence de potentiel
Une jonction inoique entre les électrodes laisse passer les ions sans fuite de la solution
* Électrode à membrane
la membrane permet le passage des ions (entre les H+ de la solution et N+ du verre)
Elle est au fond de l'électrode, entre la solution et l'électrode
La surface est ionisable -> charge de surface
On calcule la différence de potentiel entre l'intérieur et l'extérieur de la membrane
(qui sera comparée à celle de l'électrode de référence)
* Automatisation
Module ISE (Ion Selective Electrode)
En «limite de phase" (= au contact de la membrane)
La membrane est équilibrée avec les ions de la solution de référence (Na+, K+ et Cl-)
La différence de potentiel est proportionnelle à la concentration en Na+, K+ et Cl- (équation de Nernst)
** Types
- direct = dosage et résultat rendu par litre d'eau
- *indirect* = dosage sur une dilutaion par litre de plasma mais rendu par litre d'eau
*Risque de pseudohyponatrémie* si l'eau plasmatique est remplacée par protéine/lipides
En effet,
on rend Na+/eau plasmatique en l'approchant par Na+/volume plasmatique.
En temps normal, eau plasmatique = 93% du volume plasmatique -> erreur 7%
Si l'eau plasmatique est diminuée, on n'en tient pas compte donc la concnentration sera sous-estimée
*regarder les proétine* : annulé si prot > 120G/L, commentaire si 100-120
Si Na+ < 132 et prot > 90 : à contrôler, risque pseudohyponatrémie
* Indication clinique
- Sodium : hydratation intracellulaire (136-145)
- Potassium : fonction cardiaque (3.5-5.1)
- hlore : insuf rénale, acidose métabolique (98-109)